Diagnóstico laboratorial: Doença de Aujeszky (Pseudoraiva - PRV)

Testes disponíveis:

Imunohistoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antígenos virais.
• Tipos de amostra: tecidos.
• Prós:
  • Detecta o vírus no local da lesão (bom teste de causalidade).
  • Qualquer resultado positivo é considerado significativo.
• Contras:
  • A amostra de tecido correta tem que ser enviada.
  • Requer que tenha uma quantidade significativamente maior de vírus do que o PCR.
  • Ele só avalia uma pequena quantidade de tecido.
  • Infecções latentes provavelmente serão negligenciadas a menos que o nervo trigêmeo e/ou amígdalas estejam incluídos.

Reação em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico viral (DNA).
• Tipos de amostras: tecidos.
• Prós:
  • Alta sensibilidade. A quantificação por PCR se associa com a presença de lesões.
  • Custo moderado:
    • Amostras de tecido podem muitas vezes ser combinadas para reduzir custos e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente no que diz respeito à relevância clínica).
  • Alguns testes de PCR podem diferenciar entre vírus de vacina com genes e infecção por vírus do ambiente.
• Contras:
  • Requer amostras de tecido (pos-mortem) para melhores resultados.
  • Infecções latentes provavelmente serão negligenciadas a menos que o nervo trigêmeo e/ou amígdalas estejam incluídos.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos por várias semanas.
  • Pode ser usado em casos crônicos.
  • Pode ser usado para diferenciar a exposição do vírus do ambiente ao de vacinas com genes selecionados (ver Tabela 1).
  • Qualquer resultado positivo para o vírus do ambiente é considerado significativo.
  • Leva apenas 5 a 7 dias para os animais se tornarem soropositivos após a exposição ao vírus do ambiente.

Tabela 1. Demonstra as capacidades DIVA (diferenciação entre animais infectados de vacinados) de alguns ensaios ELISA ao usar uma vacina com genes selecionados.

• Contras:
  • O ensaio adequado precisa ser combinado com a delegação genética apropriada na vacina.
  • Os animais levam de 10 a 14 dias para se tornarem soropositivos após a vacinação.

Neutralização viral (VN)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos por várias semanas.
  • Pode ser usado em casos crônicos.
  • Sensibilidade maior do que ELISA (pode detectar uma menor concentração de anticorpos).
• Contras:
  • Não é viável para um grande número de amostras.
  • Leva 12 dias para os animais se tornarem soropositivos.
  • Não distingue entre vacinação e infecção por vírus do ambiente.
  • A confiabilidade depende muito da habilidade dos técnicos.
  • A reatividade depende do isolado do vírus utilizado.

Interpretação dos resultados:

IHC

• Positivo: O vírus está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou infecção muito antiga para detectar o vírus.

PCR

• Positivo: O vírus está presente. A vacinação recente com um vírus modificado vivo pode resultar em PCR positivo.
• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção.

ELISA (gene alvo deletado)

• Positivo: Anticorpos maternos ou exposição prévia (>5-7 dias) ao ambiente com vírus.
• Negativo: Negativo ou infecção muito recente para ser detectado.

VN

• Positivo: Exposição prévia (> de 5 a 14 dias) à vacina ou ao vírus no ambiente.
• Negativo:
  • Negativo para vacina ou vírus no ambiente.
  • Infecção muito recente para ser detectada (<5-7 dias para vírus do ambiente ou <10-14 dias para a vacina).

Cenários

Granja de reprodutoras com abortos

• Coletar 6-8 fetos para fazer um pool de amostras para PCR.
• Reprodutoras/marrãs que abortaram: Coletar soro de fêmeas/marrãsque abortaram recentemente para testes de PCR. Pode-se fazer grupos de 5.
  • Testes de Elisa podem ser realizados em amostras individuais se >7 dias após o aborto.
  • Em granjas não vacinadas contra a doença de Aujeszky é preferível realizar VN em vez de ELISA devido à maior sensibilidade diagnóstica do teste.

Seleção de marrãs de reposição em granjas vacinadas com animais positivos conhecidos

• Coletar amostras de sangue de 100% das marrãs de reposição e analisar individualmente utilizando ELISA e VN.
  • Mantenha-se apenas animais positivos para VN e negativos para ELISA (ver Tabela 1 acima).

Seleção de marrãs de reposição de granjas vacinadas sem animais positivos conhecidos

• Coletar amostras de sangue de pelo menos 30 fêmeas selecionadas aleatoriamente e analisar individualmente usando ELISA e VN.
  • Se todas as amostras analisadas forem positivas para VN e negativas para ELISA (ver Tabela 1 acima), você pode manter todos os animais na reposição.
  • Se alguma amostra for negativa à VN, 100% dos marrãs restantes deverão ser testadas e apenas as marrãs vacinadas (VN = positivo) devem ser mantidas.
  • Se alguma das marrãs for positiva para a ELISA, reavalie o valor de permanência de qualquer animal no grupo, pois o resultado sugere que a granja de origem agora é positiva para a doença de Aujeszky.