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Diagnóstico laboratorial: Peste suína africana

Quais métodos de diagnóstico laboratorial posso usar para diagnosticar a peste suína africana? Qual devo escolher de acordo com a situação? Como posso interpretar os resultados?

Testes disponíveis:

O gráfico abaixo mostra as mudanças na concentração (eixo Y) ao longo do tempo (eixo X) dos diferentes componentes de uma amostra usada ​​nos ensaios. Após a exposição, a presença do vírus no sangue (viremia) aparecerá em 1 ou 2 dias e durará 3-4 semanas. A soroconversão (detecção de anticorpos) geralmente ocorre em até 14 dias após a exposição e dura muitos meses ou anos.

Figura 1. Esquema de detecção de vírus e anticorpos, assim como a variabilidade na virulência da cepa após exposição a PSA. Fonte: Laboratório de Referência da União Europeia para PSA.
Figura 1. Esquema de detecção de vírus e anticorpos, assim como a variabilidade na virulência da cepa após exposição a PSA. Fonte: Laboratório de Referência da União Europeia para PSA.

Reação em cadeia de polimerase (PCR)

  • Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico (DNA) viral.
  • Tipos de amostras: soro, sangue ou tecidos.
  • Prós:
    • Método mais sensível e preferido para detectar o agente.
    • Custo moderado:
      • Frequentemente, as amostras podem ser agrupadas para reduzir custos e minimizar a perda de sensibilidade.
  • Contras:
    • Requer primers adequados.

Hemadsorção (HAT)

  • Detecta a presença de vírus através da ligação de eritrócitos à membrana externa (citoplasmática) de macrófagos suínos infectados com o vírus PSA.
  • Tipos de amostras: soro e plasma.
  • Prós:
    • Um dos testes padrão de referência.
  • Contras:
    • Algumas cepas do ambiente não induzem hemadsorção e resultados negativos geralmente requerem confirmação por PCR.

Ensaio de imunoabsorção enzimática de detecção de antígeno (Ag-ELISA)

  • Detecta a presença do agente.
  • Tipos de amostra: geralmente sangue e possivelmente outros tecidos específicos (siga as recomendações do kit).
  • Prós:
    • Kits comerciais disponíveis.
    • Relativamente barato.
  • Contras:
    • Menos sensível que o PCR.
    • O agrupamento de amostras não é recomendado.
    • Os resultados negativos geralmente requerem confirmação por PCR.

Ensaio de imunoabsorção enzimática de detecção de anticorpos (Ab-ELISA)

  • Detecta a presença de anticorpos.
  • Tipos de amostras: soro ou plasma.
  • Prós:
    • Os animais permanecem positivos por vários meses ou anos.
    • Pode ser usado em casos crônicos.
    • Pode ser usado em casos de baixa virulência / subclínicos.
    • A soroconversão geralmente ocorre em 7 a 10 dias.
    • Atualmente não existem vacinas comerciais disponíveis que confundam a interpretação dos resultados.
  • Contras:
    • Demora 7 a 10 dias para os animais se tornarem soropositivos.
    • Não faz distinção entre anticorpos maternos e exposição.

Anticorpos fluorescentes indiretos (IFA)

  • Detecta a presença de anticorpos.
  • Tipos de amostras: soro ou plasma.
  • Prós:
    • Teste de confirmação em amostras positivas no teste ELISA.
  • Contras:
    • Os animais precisam estar infectados há pelo menos 1 semana.
    • Não é viável para um grande número de amostras.
    • Os resultados dependem da cepa do vírus usada no teste.
    • A confiabilidade é altamente dependente da habilidade dos técnicos que executam o teste.
Figura 2. Diagrama demonstrando o uso de IFA como um teste confirmatório para amostras que são positivas para PSA por ELISA. Uma amostra negativa presumida que gera um resultado ELISA negativo é considerada negativa. Se o resultado da amostrar der positivo, então o teste IFA pode ser realizado como um teste de confirmação. Ou seja, se o teste IFA for positivo, a amostra é confirmada como positiva. Se o teste IFA for negativo, presumiremos que foi um falso positivo, desde que o PCR também seja negativo para confirmar que não há infecção recente.
Figura 2. Diagrama demonstrando o uso de IFA como um teste confirmatório para amostras que são positivas para PSA por ELISA. Uma amostra negativa presumida que gera um resultado ELISA negativo é considerada negativa. Se o resultado da amostrar der positivo, então o teste IFA pode ser realizado como um teste de confirmação. Ou seja, se o teste IFA for positivo, a amostra é confirmada como positiva. Se o teste IFA for negativo, presumiremos que foi um falso positivo, desde que o PCR também seja negativo para confirmar que não há infecção recente.

Imunoperoxidase indireta (IPT)

  • Procura a presença de anticorpos.
  • Tipos de amostra: soro ou plasma.
  • Prós:
    • Teste de confirmação em amostras positivas no teste ELISA.
  • Contras:
    • Os animais precisam estar infectados há pelo menos 1 semana.
    • Não é viável para um grande número de amostras.
    • Os resultados dependem da cepa do vírus usada no teste.
    • A confiabilidade é altamente dependente da habilidade dos técnicos que executam o teste.
Figura 3. Diagrama demonstrando o uso de IPT como um teste confirmatório para amostras que são positivas para PSA por ELISA. Uma amostra negativa presumida que gera um resultado ELISA negativo é considerada negativa. Se o resultado da amostra der positivo, então o teste IPT pode ser realizado como um teste de confirmação. Ou seja, se o teste IPT for positivo, a amostra é confirmada como positiva. Se o teste IPT for negativo, assumiremos que foi um falso positivo, desde que a PCR também seja negativa para confirmar que não há infecção recente.
Figura 3. Diagrama demonstrando o uso de IPT como um teste confirmatório para amostras que são positivas para PSA por ELISA. Uma amostra negativa presumida que gera um resultado ELISA negativo é considerada negativa. Se o resultado da amostra der positivo, então o teste IPT pode ser realizado como um teste de confirmação. Ou seja, se o teste IPT for positivo, a amostra é confirmada como positiva. Se o teste IPT for negativo, assumiremos que foi um falso positivo, desde que a PCR também seja negativa para confirmar que não há infecção recente.

Interpretação de resultados:

Normalmente, vários testes são necessários para fornecer uma melhor interpretação do diagnóstico de PSA.

Tabela 1. Interpretação dos resultados diagnósticos da PSA. Fonte: Laboratório de Referência da União Europeia para a Peste Suína Africana.

Testes Resultado Cenários mais prováveis
PCR Fraco (Ct>35)

O animal foi infectado recentemente e ainda não foi soroconvertido (<7 dias). Os sinais clínicos podem não ser específicos.

Ab-ELISA Negativo
IPT Negativo
PCR Positivo O animal foi infectado recentemente, apresenta sinais clínicos e inicia soroconversão (7 a 10 dias).
Ab-ELISA Negativo
IPT Positivo
PCR Positivo

a) Infecção contínua. O animal permanece virêmico com sinais clínicos e já soroconvertido (> 10 dias).

b) Reinfecção de um animal com anticorpos pré-formados de uma infecção anterior (suíno recuperado, sobrevivente). O título do IPT fornecerá informações sobre o momento da infecção.

Ab-ELISA Positivo
IPT Positivo
PCR Fraco (Ct>35) ou Negativo

a) Infecção passada. O animal se recuperou de infecção aguda ou subaguda e pode não apresentar sinais clínicos.

b) O animal estava infectado com uma cepa atenuada (com ou sem sinais clínicos).

c) Reinfecção de um animal com anticorpos pré-formados de uma infecção anterior (suíno recuperado, sobrevivente). O título IPT oferecerá informações sobre o momento da infecção.

Ab-ELISA Positivo
IPT Positivo

PCR

  • Positivo: O vírus está presente; infecção atual.
  • Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for feito muito tempo após a infecção.

HAT

  • Positivo: O vírus está presente; infecção atual.
  • Negativo: Negativo, infecção por uma cepa não hemadsorvente ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção. O negativo deve ser confirmado por PCR.

Ag-ELISA

  • Positivo: O vírus está presente; infecção atual.
  • Negativo: Negativo, vírus presente, mas em baixas concentrações, ou vírus não detectado se o teste for feito muito tempo após a infecção. O negativo deve ser confirmado por PCR.

Ab-ELISA

  • Positivo: Anticorpos maternos ou exposição anterior (> 7-10 dias) ao vírus.
  • Negativo: Negativo ou infecção muito recente para ser detectada.

IFA

  • Positivo: Anticorpos maternos ou exposição anterior (> 7-10 dias) ao vírus.
  • Negativo: Negativo ou infecção muito recente para ser detectada.

IPT

  • Positivo: Anticorpos maternos ou exposição anterior (> 7-10 dias) ao vírus.
  • Negativo: Negativo ou infecção muito recente para ser detectada.

Cenários:

É importante ressaltar que alguns países podem exigir a aprovação da autoridade competente antes que seja realizado qualquer teste de PSA .

Suspeita de surto agudo de PSA em suínos de qualquer idade

  • Coletar sangue de vários animais afetados e analisar pelo teste de PCR; pode considerar o agrupamento de amostras.
  • Coletar fragmentos de baços e amígdalas de suínos que morreram e analisar pelo teste de PCR; pode considerar o agrupamento de amostras.
Foto 1. Amostragem em caso de suspeita de PSA. Foto cortesia da Dra. Nadezhda Konovalova.
Foto 1. Amostragem em caso de suspeita de PSA. Foto cortesia da Dra. Nadezhda Konovalova.

Suspeita de circulação crônica de PSA em suínos de qualquer idade sem mortalidade

  • Coletar sangue de 30 suínos com sinais clínicos (amostragem direcionada) ou selecionados aleatoriamente (sem sinais clínicos) e analisar por PCR (agrupamento de amostras pode ser considerado) e individualmente por Ab-ELISA.

Consulte o ''guia de enfermidades'' para mais informações

Peste Suína AfricanaA peste suína africana é uma das doenças virais mais importantes em suínos. É uma doença sistêmica e é relatada na maioria dos países do mundo.

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