Diagnóstico laboratorial: Febre Aftosa

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Identificação de lesões, principalmente vesículas nas áreas do focinho e pernas.
• Prós:
  • Fácil identificação macroscópica das vesículas.
• Contras:
  • Clinicamente não se distingue de outras doenças vesiculares.
  • Geralmente requer outra confirmação diagnóstica.

Reação em cadeia de polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico viral (RNA).
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferido), soro, amostra esôfago-laringe (quando a vesícula biliar ou epitélio não estiver disponível), leite.
• Prós:
  • Método mais sensível e preferido para detectar o agente.
  • Muitas vezes, as amostras podem ser agrupadas para reduzir custos e minimizar a perda de sensibilidade.
  • Ele pode ter como alvo proteínas universais para detecção geral ou proteínas específicas de sorotipos para sorotipagem.
• Contras:
  • Custo moderado.
  • Requer primers (iniciadores) apropriados, especialmente se tiver como alvo proteínas estruturais específicas do sorotipo.

Lista de sorotipos atualmente conhecidos para febre aftosa (não há proteção cruzada entre os sorotipos):

• Asia 1
• África do Sul Tipo 1 (SAT 3)
• África do Sul Tipo 1 (SAT 2)
• África do Sul Tipo 1 (SAT 1)
• C
• A
• O

Ensaio de imunoabsorção enzimática para detecção de antígeno (Ag-ELISA)

• Detecta a presença do antígeno.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferido), soro, amostra esôfago-laringe (quando a vesícula biliar ou epitélio não estiver disponível), leite.
• Prós:
  • Método de escolha para detecção e identificação do sorotipo.
  • Pode ser utilizado no diagnóstico de um único animal ou em nível de granja.
  • Pode ser usado para diferenciar sorotipos.
  • Qualquer resultado positivo para o vírus de campo é considerado significativo.

Tabela 1. Diferentes proteínas virais podem ser usadas para auxiliar nos objetivos diagnósticos.

• Contras:
  • A presença de antígeno viral pode ser específica do sorotipo.
  • Vários testes podem ser necessários para identificar os sorotipos.

Ensaio de imunoabsorção enzimática para detecção de anticorpos (Ab-ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Prós:
  • Os anticorpos circulantes podem ser detectados 3 a 5 dias após o aparecimento dos sinais clínicos.
  • Os animais permanecem positivos durante vários meses.
  • Pode ser usado em casos mais antigos.
  • Pode ser usado para diferenciar a exposição ao vírus de campo de algumas vacinas mortas/recombinantes (visando proteínas não estruturais específicas).
  • Qualquer resultado positivo para o vírus de campo é considerado significativo.
• Contras:
  • A resposta de anticorpos é específica do sorotipo.
  • Alguns animais podem permanecer soropositivos durante vários anos.
  • A força da resposta imune pode variar com a virulência da cepa.
  • A presença de anticorpos nem sempre se correlaciona com proteção.

Dispositivos de fluxo lateral

• Detecta a presença do antígeno.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio.
• Prós:
  • Método de escolha para detecção e identificação do sorotipo.
  • Pode ser utilizado no diagnóstico de um único animal ou em nível de granja.
  • Pode ser usado para diferenciar sorotipos.
  • Qualquer resultado positivo para o vírus de campo é considerado significativo.
  Contras:
  • A presença de antígeno viral pode ser específica do sorotipo.
  • Menos sensível que Ag-ELISA
  • Vários testes podem ser necessários para identificar os sorotipos.
    ​

Isolamento do vírus

• Isola o vírus vivo.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferido), soro, amostra esôfago-laringe (quando a vesícula biliar ou epitélio não estiver disponível), leite.
• Prós:
  • Critério de referência.
  • Isolamento do vírus para utilização no desenvolvimento de vacinas (vacinas autógenas) ou testes sorológicos (ELISA) para determinação do sorotipo.
• Contras:
  • Caro.
  • Resultados lentos.
  • Requer linhas celulares especiais; células da tireoide de bovino (bezerro) ou células renais de suíno, vitelo ou cordeiro.
  • O processo de inoculação é muito trabalhoso.
  • Muitas vezes difícil de cultivar (muitos falsos negativos).

Sequenciamento genético

• Sequencia segmentos genéticos do ácido nucleico (RNA) do vírus.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferido), soro, amostra esôfago-laringe (quando a vesícula biliar ou epitélio não estiver disponível), leite.
• Prós:
  • Pode ajudar na epidemiologia molecular.
  • Ajuda a identificar o sorotipo.
• Contras:
  • Caro.
  • Resultados lentos.

Interpretação de resultados:

Lesões macroscópicas (vesículas)

• Positivo: Deve ser investigado como possível febre aftosa.
• Negativo: Negativo ou não detectado se o teste for realizado muito depois da infecção ou se a infecção for proveniente de uma cepa leve.

PCR

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito depois da infecção.

Ag-ELISA

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se o sorotipo errado tiver sido testado.

Ab-ELISA

• Positivo: Anticorpos maternos ou exposição prévia (>2-3 dias) a vírus de campo ou algumas vacinas.
• Negativo: Negativo ou exposição à vacina ou vírus de campo muito recente para ser detectado ou foi testado para anticorpos do sorotipo errado.

Dispositivos de fluxo lateral

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se o sorotipo errado tiver sido testado.

Isolamento do vírus

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se a linhagem celular errada tiver sido usada.

Sequenciamento genético

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se houver muito pouco vírus presente para sequenciamento.

Casos clínicos

É importante notar que em alguns países pode ser necessária a aprovação das autoridades competentes antes de qualquer teste de febre aftosa poder ser realizado.

Suspeita de surto agudo de febre aftosa em suínos de qualquer idade e a granja não está vacinada contra febre aftosa

• Coletar líquido vesicular de diversos animais afetados e analisá-lo por Ag-ELISA ou PCR; o agrupamento de amostras pode ser considerado para PCR.

Suspeita-se de surto agudo de febre aftosa em suínos de qualquer idade e a granja está vacinada contra febre aftosa

• Coletar líquido vesicular de diversos animais afetados e analisá-lo por Ag-ELISA ou PCR; o agrupamento de amostras pode ser considerado para PCR.
• Coletar soro de vários animais afetados que apresentem sinais clínicos há pelo menos 3 dias e analisá-los individualmente por Ab-ELISA; têm como alvo uma proteína não estrutural que não está presente na vacina.

Suspeita de circulação de febre aftosa em suínos de qualquer idade sem sinais clínicos e a granja não está vacinada contra febre aftosa

• Coletar soro de 30 suínos amostrados aleatoriamente e analisar individualmente por Ab-ELISA; proteína estrutural alvo.

Suspeita de circulação de febre aftosa em suínos de qualquer idade sem sinais clínicos e a granja está vacinada contra febre aftosa

• Coletar soro de 30 suínos amostrados aleatoriamente e analisar individualmente por Ab-ELISA; têm como alvo uma proteína não estrutural que não está presente na vacina.